本发明公开了一种梨树抗腐烂病快速鉴定方法，该方法利用梨树一年生休眠枝条的“皮孔相对面积”与人工接种梨树的发病程度之间存在显著的正相关这一规律，选取梨树一年生休眠枝条，通过测定枝条表皮的“皮孔相对面积”，对梨树的抗腐烂病进行分级；与现有技术相比，本发明具有快速、简便、高效的特点。
1.一种梨树抗腐烂病快速鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）取梨树一年生休眠枝条，剥下枝条的表皮，测定表皮上的皮孔占整个表皮的面积比率，获得“皮孔相对面积”；（2）抗病性分级：“皮孔相对面积”≤2%的梨树品种为高抗类型，“皮孔相对面积”在开区间（2%，6%）的梨树品种为中间类型，“皮孔相对面积”≥6%的梨树品种为易感类型。
2.如权利要求1所述的一种梨树抗腐烂病快速鉴定方法，其特征在于，所述步骤（1）中，一年生休眠枝条为梨树落叶后至萌芽前的树冠外围的一年生枝条。
3.如权利要求1或2任一所述的一种梨树抗腐烂病快速鉴定方法，其特征在于，所述步骤（1）中，一年生休眠枝条的取样部位为枝条的中部。
4.如权利要求1所述的一种梨树抗腐烂病快速鉴定方法，其特征在于，所述步骤（1）中，表皮的剥取面积为1～2平方厘米。
5.如权利要求1所述的一种梨树抗腐烂病快速鉴定方法，其特征在于，所述步骤（1）中，“皮孔相对面积”的测定方法为：首先用300dpi以上精度扫描表皮，保存成像，测定表皮的总像素值和皮孔的总像素值，皮孔的总像素值与表皮的总像素值的比率即为“皮孔相对面积”。技术领域
本发明涉及的是一种梨树疾病的鉴定方法，尤其涉及的是一种梨树抗腐烂病快速鉴定方法。
背景技术
梨树腐烂病在我国梨各主产区均有发生，以新疆、西北、华北等地发生较重。据目前调查，新疆库尔勒香梨病株率已达50%～80%，西北地区酥梨病株率达30%～50%；华北地区鸭梨、雪花梨发病株率均达30%以上。腐烂病具有发生区域广、发病率高、难以控制的特点，发病严重的梨园，树体病疤累累、枝干残缺不全，甚至造成大量死树或毁园，严重威胁到我国梨产业的健康发展。通过新技术的开发和多种技术的集成，针对不同生态区组建可持续的梨腐烂病综合防控技术体系，虽然可为提升我国梨腐烂病防控技术水平。但是，培育筛选出抗腐烂病的优良新品种、并进行大面积推广，是有效控制梨树腐烂病蔓延加重、保障我国梨的安全生产的必经之路。目前，鉴定梨树不同品质资源对腐烂病的抗性，只有取一年生休眠枝条样本，采用电烙铁烫伤离体接种，或者对田间苗木进行刻伤原位接种。这样，不仅需要活化培养大量的菌源，接种后尚需等待一周左右，才能统计试验结果。由此可见，对于梨树抗腐烂病鉴定评价，尚缺乏快速、简便、有效的方法。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供了一种梨树抗腐烂病快速鉴定方法，以提供一种快速、简便、有效的方法鉴定出高抗类型的梨树抗腐烂病品种。本发明是通过以下技术方案实现的，本发明包括以下步骤：一种梨树抗腐烂病快速鉴定方法，包括以下步骤：（1）取梨树一年生休眠枝条，剥下枝条的表皮，测定表皮上的皮孔占整个表皮的面积比率，获得“皮孔相对面积”；（2）抗病性分级：“皮孔相对面积”≤2%的梨树品种为高抗类型，“皮孔相对面积”在开区间（2%，6%）的梨树品种为中间类型，“皮孔相对面积”≥6%的梨树品种为易感类型。优选地，所述步骤（1）中，一年生休眠枝条为梨树落叶后至萌芽前的树冠外围的一年生枝条。优选地，所述步骤（1）中，一年生休眠枝条的取样部位为枝条的中部。优选地，所述步骤（1）中，表皮的剥取面积为1～2平方厘米。优选地，所述步骤（1）中，“皮孔相对面积”的测定方法为：首先用300dpi以上精度扫描表皮，保存成像，测定表皮的总像素值和皮孔的总像素值，皮孔的总像素值与表皮的总像素值的比率即为“皮孔相对面积”。本发明的工作原理是：本发明选取了各种类品种代表资源38份（来源于梨属的12个种），用传统电烙铁烫伤、离体接种法鉴定不同品种资源对腐烂病的抗性，再通过形态学、细胞学、生理学和分子生物学等方面指标的测定结果进行相关性分析，最终发现，梨树一年生休眠枝条的“皮孔相对面积”与人工接种梨树的发病程度之间存在显著的正相关（其相关系数r=0.9381）。因此，确立了用“皮孔相对面积”替代传统接种方法鉴定梨树不同品种资源对腐烂病的抗性程度的可行性。本发明相比现有技术具有以下优点：本发明提供了一种梨树抗腐烂病快速鉴定方法，该方法只需剥取梨树一年生休眠枝条的表皮，测定“皮孔相对面积”，即可将梨树抗腐烂病定性分级，具有快速、简便、高效的特点；而传统的电烙铁烫伤、离体接种法，接种前需要活化大量菌种，接种需要的枝条数量多，接种后需要培养7～10天才能进行观察鉴定，鉴定周期长。
具体实施方式
下面对本发明的实施例作详细说明，本实施例在以本发明技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，但本发明的保护范围不限于下述的实施例。实施例1本实施例选取六月鲜梨、南果梨和蒲城雪三种梨树品种代表资源，进行抗腐烂病快速鉴定，包括以下步骤：（1）分别取落叶后至萌芽前的上述两种梨树品种的树冠外围一年生休眠枝条，剥下枝条中部的表皮，所述表皮的剥取面积约1平方厘米，用透明粘胶将表皮固定于白纸上，重复5次；a、以300bpi精度的扫描仪扫描固定在白纸上的表皮，保存成像；b、运用photoshop图像处理软件，以正方形选择工具选取皮孔分布均匀的单位表皮面积，在“图像”菜单中的“直方图”栏目中查得该单位表皮面积的像素值Sa；c、增加图像的“亮度”和“对比度”，选择“魔棒工具”，调整“容差”值，使得“魔棒工具”正好能够选定所有皮孔为宜，然后在“图像”菜单中的“直方图”栏目中查得该单位表皮面积内皮孔面积的像素值La；d、计算枝条表皮的“皮孔相对面积”RA（%），RA=La/Sa×100%；（2）抗病性分级：六月鲜梨：La=806，Sa=43818，RA=1.84%，为高抗类型；南果梨：La=2436，Sa=43820，RA=5.56%，为中间类型；蒲城雪：La=4710，Sa=44019，RA=10.70%,为易感类型。实施例2本实施例选取38份梨树品种代表资源，涉及不同国家和地区的12个种和一个种间杂种，鉴定这38份梨树品种资源的抗腐烂病程度，包括以下步骤：（1）于12月份选取上述38份梨树品种代表资源，取树冠外围一年生休眠枝条3支，剥下枝条中部的表皮表皮的剥取面积约2平方厘米，用透明粘胶将表皮固定于白纸上；a、以300bpi精度的扫描仪扫描固定在白纸上的表皮，保存成像；b、运用photoshop图像处理软件，以正方形选择工具选取皮孔分布均匀的单位表皮面积，在“图像”菜单中的“直方图”栏目中查得该单位表皮面积的像素值Sa；c、增加图像的“亮度”和“对比度”，选择“魔棒工具”，调整“容差”值，使得“魔棒工具”正好能够选定所有皮孔为宜，然后在“图像”菜单中的“直方图”栏目中查得该单位表皮面积内皮孔面积的像素值La；d、计算枝条表皮的“皮孔相对面积”RA（%），RA=La/Sa×100%；（2）抗病性分级：“皮孔相对面积”≤2%的梨树品种为高抗类型，“皮孔相对面积”在开区间（2%，6%）的梨树品种为中间类型，“皮孔相对面积”≥6%的梨树品种为易感类型，鉴定结果如表1所示。同时，以上述38份梨树品种代表资源的树冠外围一年生休眠枝条为试验材料，采用电烙铁烫伤、离体接种法作为对照组。每份资源取长30～40厘米枝段5根，在每根枝段的枝皮上用电烙铁烙制3个直径约5～7mm的伤口，伤口深度达木质部，其中4根枝条的伤口处接种用马铃薯葡萄糖琼脂培养基PDA培养4天、打孔直径为5mm的腐烂病菌饼,另一根枝条伤口以无菌的PDA接种作为对照。各处理的枝段放塑料保鲜盒中，无菌湿润纱布保湿，置于25℃恒温培养3天后，每隔24小时观察保湿与发病情况，在接种后10d测量扩展病斑直径，计算各品种病斑“扩展系数”Ec，代表各品种接种发病程度：Ec=∑（扩展病斑直径－电烙铁打孔直径）/发病孔数。依据接种点病斑扩展情况，将这38份梨树品种代表资源进行抗病性分级，共划分为三个等级：高抗类型：Ec≤6；中间类型：6<Ec<50；易感类型：Ec≥50本发明与传统接种鉴定结果如下表1所示：表1：梨树品种代表资源抗腐烂病鉴定结果ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="467"/>ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>表1中可以看出，本发明所述方法的鉴定结果与传统电烙铁烫伤、离体接种法的鉴定结果完全一致，检出率达100%；另一方面，传统鉴定方法耗时7～10天，而本发明所述方法耗时只有1小时左右，因此，相比于传统方法，本发明所述方法优势显著。